更新時(shí)間:2021-08-06
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請教問題:
問 :
1 在稀釋抗體中加入的蛋白穩(wěn)定劑是什么?
2 在試劑盒的研發(fā)中,您認(rèn)為什么是重要的?是抗體嗎?
3 ELISA檢測的靈敏度是由抗體的特性決定的,那么有否可能通過優(yōu)化各種條件使得成型的試劑盒的靈敏度得到較大的提高?
4 顯色系統(tǒng)中為什么不用OPD呢?它比TMB靈敏呀?
答 :
1)一般就先用一些無關(guān)蛋白,如果不行可以添加少量甘油,如果還不行則需購買專門的穩(wěn)定劑了。
2)原料重要,只要是原料無論抗體和抗原都很重要。
3)檢測的靈敏度主要是由原料決定的,但可以通過調(diào)整濃度以及其它條件進(jìn)行改善。
4)現(xiàn)在的國內(nèi)商品試劑盒都使用TMB了,TMB實(shí)際上比OPD靈敏,相對(duì)來說OPD比較穩(wěn)定,但是OPD有致癌性。
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實(shí)驗(yàn)過程中孵育可能碰到的問題:
& 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*
& 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*
相應(yīng)解決辦法:
& 貼封片或加蓋
& 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)
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