更新時(shí)間:2021-07-19
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樣品收集、處理及保存方法:
1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,使用不含熱原的試管,收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè),1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。
血清跟血漿的本質(zhì)區(qū)別:
A 血 漿:離開(kāi)血管的全血經(jīng)抗凝處理后,通過(guò)離心沉淀,所獲得的不含細(xì)胞成分的液體,即血漿
B 血 清:離體的血液凝固之后,jing血凝塊聚縮釋出的液體,即血清,粗略的說(shuō)
C 血清與血漿的區(qū)別 = 主要在于血清不含纖維蛋白元
利用交叉實(shí)驗(yàn)辨別ELISA試劑盒是否造假,方法如下:
R1、取出購(gòu)買的A的包被板兩條。
R2、一條包被板加試劑盒A的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
R3、另一條包被板加試劑盒B的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
R4、后續(xù)操作按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行,加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物。
R5、實(shí)驗(yàn)完畢后,檢測(cè)兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線一致則說(shuō)明兩個(gè)ELISA試劑盒檢測(cè)的同一個(gè)指標(biāo)而非A和B,即該試劑盒為偽劣假造ELISA試劑盒。
R6、小鼠L選擇素L-Selectin/CD62LELISA試劑盒如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線不一致則說(shuō)明兩個(gè)ELISA試劑盒檢測(cè)的不同指標(biāo),試劑盒A只能檢測(cè)A,不能檢測(cè)B,即該試劑盒為正常的ELISA試劑盒。
結(jié)果判斷與分析:
1) 儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值。
2) 以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的GHR標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的GHR含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3) 檢測(cè)值范圍:0-80ng/ml
4) 敏感度: 0.1 ng/ml
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