更新時(shí)間:2021-09-02
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血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測
◆ 如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。
◆ 如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。
◆ 一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。
◆ 混勻器上強(qiáng)烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。
◆ 反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。
◆ 保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。
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注意事項(xiàng):
◆ 標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測,如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
◆ 凍結(jié)標(biāo)本溶解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混合,不要在混勻器上強(qiáng)烈震蕩。
◆ 渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。
◆ 反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低,所以代測樣本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。
◆ ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線平直,一般有以下原因:標(biāo)準(zhǔn)曲線制備是否不當(dāng),洗孔不凈,吸孔不充分,讀數(shù)不準(zhǔn)確或是吸量誤差。查找原因,即可找到相應(yīng)解決方案。
實(shí)驗(yàn)的基本操作流程:
A 包被ELISA板子或使用商品化ELISA板
B 讓標(biāo)本中的抗原/抗體與固相載體上的抗體/抗原結(jié)合,形成固相復(fù)合物。
C 根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行抗原/抗體的定性或定量。
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