流式細胞術(Flow Cytometry,FCM)是一種對單細胞或其他生物粒子膜表面以及內部的化學成分進行定量分析和分選的檢測手段,它可以高速分析上萬個細胞,并能同時從一個細胞中測得多個參數,同傳統(tǒng)的熒光鏡檢查相比,具有速度快,精度高準確性好等特點,成為當代的細胞定量分析技術。自20世紀70年代以來,隨著流式細胞技術水平的不斷提高,其應用范圍也日益廣泛。目前,流式細胞已普遍應用于免疫學、血液學、細胞生物學、細胞遺傳學、生物化學及腫瘤學等臨床醫(yī)學和基礎醫(yī)學領域。
流式細胞儀集電子技術,計算機技術、流體理論于一體,是一種非常先進的檢測儀器。流式細胞儀的發(fā)展始于1953年,Parker和Horst設計一種全血細胞計數器裝置,該儀器成為流式細胞儀的雛形。其原理是先將全血細胞進行染色,白細胞染為藍色,紅細胞仍為紅色,當細胞懸液通過檢測細玻璃管時用一束光進行照射,不同細胞所發(fā)出的藍光或紅光經過濾光片后分別由兩個光電轉換器轉換為電信號,再由計數電路分別計數。
流式細胞儀是由流動室及液流驅動系統(tǒng)、激光光源及光束成形系統(tǒng)、光學系統(tǒng)、信號檢測與存貯、顯示、分析系統(tǒng)及細胞分選系統(tǒng)等五部分組成。
流式細胞儀的基本原理是將待測細胞染色后制成單細胞懸液。用一定壓力將待測樣品壓入流動室,不含細胞的磷酸緩中液在高壓下從鞘液管噴出,鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度,這樣鞘液就能夠繞著樣品高速流動,組成一個圓形的流束,待測細胞在鞘液的包被下單行排列,依次通過檢測區(qū)域。流式細胞儀通常以激光作為激發(fā)光源。經過聚焦整形后的光束,垂直照射在樣品流上,被熒光染色的細胞在激光束的照射下產生散射光和激發(fā)熒光。
這兩種信號同時被前向光電二極管和90度方向的光電倍增管(PMT)接收,光散射信號在前向角度10.5-2.0度進行檢測,這種信號基本上反映了細胞體積大?。粺晒庑盘柕慕邮辗较蚺c激光束垂直,經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,形成多個不同波長的熒光信號。這些熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度,經光電倍增管接收后可轉換為電信號,再通過模/數轉換器,將連續(xù)的電信號轉換為可被計算機識別的數字信號。
計算機采集所測量得到的各種信號進行計算處理,將分析結果顯示在計算機屏幕上,也可以打印出來,還可以數據文件的形式存貯在硬盤上以備日后的查詢或進一步分析。細胞的分選是通過分離含有單細胞的液滴而實現的。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體,充電后振動,使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴以正負不同的電荷,當液滴流經帶有幾千伏的偏轉板時,在高壓電場的作用下偏轉,落入各自的收集容器中,不予充電的液滴落入中間的廢液容器,從而實現細胞的分離。
流式細胞儀在免疫學、血液病學、細胞增殖及腫瘤病理、細胞凋亡和流式核型分析等領域均發(fā)揮著重要的作用。
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