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免疫組化中抗體選擇要求

1、一抗選擇要點(diǎn)

（1）選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合，就象導(dǎo)彈地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)較低；而多克隆抗體特異性稍弱，抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過(guò)封閉等有所避免）。

（2）種屬來(lái)源。一般家兔來(lái)源的抗體多是多克隆；而小鼠來(lái)源的抗體多是單克隆，但也有另外。這條主要要與后面的二抗來(lái)源相匹配。

（3）實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菣z測(cè)什么種屬的抗原，即species reactivity。這一點(diǎn)很重要，一般說(shuō)明書(shū)上都有注明，如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。

（4）能否做免疫組化。一般一抗說(shuō)明書(shū)都會(huì)注明做WB、IHC、ICC、IF等，建議選擇注明的抗體，因?yàn)橐话愣际墙?jīng)過(guò)文章證明。

（5）檢測(cè)標(biāo)本類型。用于檢測(cè)石蠟切片還是冰凍切片，一般能做石蠟切片的抗體，可能都可以用來(lái)檢測(cè)冰凍切片，但能做冰凍切片的抗體，不一定能檢測(cè)石蠟切片中的抗原。

（6）生產(chǎn)廠家。國(guó)外抗體生產(chǎn)商原裝抗體質(zhì)量一般沒(méi)問(wèn)題，但有點(diǎn)貴；而國(guó)內(nèi)分裝廠家用的一抗工作液，價(jià)格便宜，但有時(shí)結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性稍差，尤其不同批次重復(fù)性較差。

（7）價(jià)格與質(zhì)量的矛盾。一抗原裝質(zhì)量可能會(huì)好點(diǎn)，因?yàn)樵S多一抗避免反復(fù)凍融，且在稀釋液中穩(wěn)定性較差（若時(shí)間長(zhǎng)），但價(jià)格較貴。


2、二抗選擇要點(diǎn)

（1）種屬來(lái)源。主要根據(jù)一抗種屬來(lái)源來(lái)決定購(gòu)買(mǎi)二抗來(lái)源，如一抗是小鼠來(lái)源，那二抗就買(mǎi)抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。

（2）標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng)；而免疫熒光染色就需要購(gòu)買(mǎi)不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。這主要與后面有無(wú)三抗和三抗種類有關(guān)。

（3）選擇IgM還是IgG。一般一抗是IgM，那么二抗就選擇IgM；反之，一抗是IgG，則二抗選擇IgG。